[摘要]目的：探讨细胞涂片HE染色褪色后免疫染色的效果。方法：选取21例细胞涂片HE染色诊断后再褪色进行免疫染色。结果：免疫染色效果较好，与其组织学对照，无显著性差异（P＞0.05）。结论：细胞涂片HE染色褪色后免疫染色，简便易行，在病理诊断中有一定的使用价值。
[关键词]脱落细胞学；HE染色；细胞免疫染色；免疫组化
[中图分类号]R446.8[文献标识码]B[文章编号]1673-7210（2007）08（a）-124-02
在临床细胞病理诊断中，常遇到难以诊断或难以分型的特殊细胞或细胞组合，需要做免疫染色进一步确定。但有时又难以重新获得标本制片，或重新制成的涂片又没有原涂片中的特殊细胞或细胞组合。因此，在原涂片上进行免疫染色成为关键。本研究探讨了细胞涂片HE染色褪色后免疫染色的效果。
1 材料与方法
1.1材料
选取我院2006~2007年间收治的具有组织学对照的细胞涂片并被诊断为恶性肿瘤的21例病例。
1.2 方法
HE染色细胞涂片均潮干固定于95%酒精中[1]15 min。显微镜观察后，在原切片上选定要进行免疫染色的目标，分别在目标背面载玻片上用钻石笔圈上记号，将目标圈入当中，并标记好要染色的抗体。然后将细胞涂片按顺序经过二甲苯、梯度酒精和水，将涂片上的盖玻片和树胶完全脱掉（没用树胶封片的可以省略此步），放入0.5%盐酸-酒精中脱掉苏木颜色后入水冲洗，再入稀氨水中脱掉伊红颜色，直到颜色明显变浅或成无色，提出载玻片放入水中，充分冲洗，待做免疫染色。做免疫染色时，首先按各种抗体的要求进行预处理并使用细胞通透剂（X-100），以充分暴露抗原和增加细胞的通透性，有利于抗原抗体的结合。相应组织学免疫染色（免疫组化）按常规进行。免疫染色过程中设立阴、阳性对照，以便正确判断染色结果。选择的单克隆抗体分别为：CEA、High MW、Low MW、Vimentin、CR、CD68、LCA、COA、CA125、CD20。所用单克隆抗体和其他相关试剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司，单克隆抗体为工作液，免疫染色方法采用MaxVision一步法。
1.3 结果判定
HE染色结果：主要根据细胞形态、排列方式及细胞与细胞之间的关系并结合临床进行初步诊断。21例细胞涂片中，均有恶性肿瘤细胞。免疫染色结果的判定：要求着色部位必须正确，背景清晰，染色鲜明，即使有个别典型着色的细胞也视为阳性[2]。21例涂片做免疫染色同时设立阴、阳性对照，并有同一肿瘤相同抗体的免疫组化对照。
1.4 统计学分析
采用χ2检验。
2 结果
21例肿瘤免疫组化染色结果与相应的细胞涂片HE染色褪色后免疫染色没有显著性差异（P＞0.05）（表1）。但就免疫染色强度来说，细胞涂片不如组织学切片。
3 讨论
在细胞涂片中，通过观察组成细胞的形态特点、排列方式和细胞之间的关系来诊断，不像组织学既有细胞形态又有组织结构。所以经常遇到一些特殊的细胞或细胞组合，难于单凭HE染色来确定诊断和/或进一步分类分型，借鉴组织学和细胞学免疫染色方法，选择合适的抗体[3]，可以在一定程度上提高诊断的准确率。细胞涂片的另一个缺点就是获取的标本重复性不如组织切片相对一致，因此，在免疫染色中往往受到一定限制。在HE染色涂片上发现的“异常细胞”，有时重新涂片时就消失了，解决这一问题的唯一办法就是在发现的“异常细胞”HE染色涂片上原位进行免疫染色，通过以上的实验可知，细胞涂片HE染色褪色后做免疫染色的效果较好。以往有人将液体标本离心沉淀制成石蜡切片，然后做免疫染色[4]，其优点是可以得到足够用于免疫染色的相同切片，但不足的是在涂片中发现的“异常细胞”，在切片中很可能看不到；也有人重新取材制片并先染苏木后在湿片情况下镜下观察、标记，不褪色直接做免疫染色[5]，这样可以寻找目标，但不如常规HE染色目标更加明确，且会影响细胞核的免疫染色。若是全片染色，又浪费抗体，不可取。本研究方法弥补了以往其他方法的不足，使细胞学诊断方法又多一条路，唯一不足的是细胞核和细胞浆的染色强度不如相应组织学切片的强，但细胞膜着色较强，可能是因为细胞脱落，或多或少地有些退变，再者细胞是完整细胞，有完整的细胞膜，尽管使用了细胞通透剂，其通透性也不如切片好，这一点需要进一步改进，但二者结果无显著性差异（P＞0.05）（表1），为了使染色强度得到提高，可以适当延长抗体与抗原的孵育时间。
[参考文献]
[1]刘树范.临床细胞学[M].北京：人民卫生出版社，1990.14-22.
[2]范嫏娣.王德延肿瘤病理诊断学[M].第2版.天津：天津科学技术出版社，1999.106.
[3]夏同礼.肿瘤实验诊断学[M].北京：北京科学技术出版社，2005.223-227.
[4]刘梦海,袁昌隆,梁忠泉.胸、腹水沉积物切片结合涂片诊断间皮瘤[J].诊断病理学杂志,2006,13(1):66-68.
[5]李红民,韩凤艳,刘宏霞,等.胸（腹）水免疫细胞化学方法改进[J].中华病理学杂志,2001,30(5):386.
（收稿日期：2007-06-19）
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